质粒图谱讲解（质粒图谱）

大家好，小蜜来为大家解答以上问题。质粒图谱讲解，质粒图谱很多人还不知道，现在让我们一起来看看吧！

1.第一步，看箭头：

大多数质粒都会有箭头，可以从两个方面解释。一个是转录方向，主要是从启动子开始的大箭头，是启动子启动序列的顺序。另一个是复制起始位点的方向，是这个质粒在细菌或真菌如大肠杆菌中DNA复制的一个方向。

还需要提到的是，F1启动子(图中f1 ori)代表噬菌体的复制起始方向，只能复制单链DNA，但可以用于测序。了解转录的方向，便于设计插入片段的位置和方向。

2.第二步，看上面的标签。

报告基因：通常有一到两种蛋白质，作为报告基因，如常见的copGFP(绿色荧光蛋白)、Puro(嘌呤霉素)、Lacz(乳糖操纵子)等。与抗性基因不同，这种报道基因不打算在大肠杆菌的质粒扩增过程中起作用。

但质粒转入表达系统后，就发挥作用了。基本上，它是为了显示过度表达或被敲除的基因是否正常工作。一些报告基因将通过蛋白质中的融合来表达，而另一些将通过独立的启动子(如shRNA的质粒)来表达。

3.步骤3，查看多克隆站点：

MCS(多克隆位点)，一般多克隆位点上的限制性位点会被标记出来。上述限制性位点的顺序通常以5’-3’的顺序排列。应注意以下几点。

第一点需要注意的是，标有*的限制性位点一般表示限制性位点不只有一个，不能作为构建质粒的限制性位点。

第二点要注意的是，序列中只有一个限制性位点，但也会有*或(dam)标记，说明这个限制性位点可能有CpG岛的甲基化修饰[常见的是XbaI，TCTAG(6m)A中的TC不能切]，一般不能用。但是，如果要使用这个限制性位点，就需要使用未甲基化的感受态细胞，如JM109或JM110。

4.第四步，看多克隆位点的序列：

如果两端有差异，基因的ATG(甲硫氨酸)的5端可以替换1-2个碱基(如GTG或GCG)，从第二个氨基酸序列开始可以完全一致。然而，通过扩增和限制性酶消化，允许插入片段具有3’末端冗余。

为了应对3’端的冗余碱基，克隆位点序列后，会有一个解码的终止TAA编码，即使插入的片段在3’端引起移码突变，表达的蛋白仍能正常终止(在酵母杂交AD质粒中，这种结构常见于AD载体上，因为插入了随机cDNA)。

扩展数据

分类

1.根据质粒能否通过细菌的接合，可分为接合质粒和非接合质粒。

合子颗粒携带与合子传递相关的基因。在某些条件下，通过诱导或转导与其共存的接合质粒来转移非接合质粒。

2.根据质粒在细菌中的复制类型，可分为紧控型和松控型两种。

严格控制复制质粒的复制酶系统与染色体DNA复制共用，只能在细胞周期的某一阶段复制。当细胞染色体停止复制时，质粒将不再复制。

控制松散复制类型的质粒的复制酶系统不受染色体DNA复制酶系统的影响，可以在整个细胞生长周期的任何时候复制，即使染色体复制已经停止，质粒也可以继续复制。

3.根据质粒的不相容性，可分为不相容性和相容性。

不相容性是指结构相似且关系密切的质粒不能在同一宿主菌中稳定共存的现象，反之亦然。常用于流行病学调查。

参考：搜狗百科-质粒

本文到此结束，希望对大家有所帮助。

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